王林发：盘点近25年来，"超级病毒"为何多数源于蝙蝠(3)

现在我想讲的是What’s next？COVID-19已经不大可能结局是SARS了，SARS当时尽管传到了20几个国家，8000多人，也死了700多人，但到最后还是通过隔离和诊断的方法，最终把这个疾病在全球控制住了。COVID-19，这种可能性有没有？不是不可能，但是可能性已经很小了。这个情况下，血清学会起很大作用。一般来说，血清学在新发的人畜共患传染病中会起到很大的作用，包括诊断，包括流行病学，一直到病理也好，整个疫苗产生制造也好，还有动物。我们做亨德拉病毒的时候，包括我们做SARS，都用的血清学。对新冠病毒来说，诊断这一块，急性期诊断，我估计血清学不会起很大作用。现在它的抗体一般要7天到14天产生，抗体能够比较灵敏的检测，这样的话我觉得还是PCR诊断可能更加准确。新冠病毒不像SARS，通过隔离的方式把它根除的可能性很小了。现在面临很多问题，大的挑战有几个。

第一个就是群体免疫。第二个是怎么样确定新冠感染过的人是安全的，能够回去工作的，获得免疫通行证。还有一个讨论比较多的就是，即使得了新冠病毒以后是否能够有保护性免疫，有多强，还有就是现在康复的血浆治疗大家都在用，中国、新加坡也在用，用的期间怎么样的血浆，不是每个病人的血浆都是可以用的。

当然最大的问题是疫苗，首先能不能产生一个好疫苗？疫苗大规模应用的时候，我们怎么判断到每个、到群体这个疫苗是不是有效。刚才也讲到，到现在为止它的自然宿主和中间宿主现在还不知道。最后一个问题，现在也开始变严重了。现在做新发传染病，人畜共患病有一个现象叫回传，从动物传到人叫传出，从它跳出来了，我们现在发现在人里面传了以后，传染给了人，假如和动物有紧密接触的话，又反过去传给动物。这叫回传，或者叫人畜共患病反向传播。新冠里已经发生了，有狗、猫、老虎都已经发现了。

这牵扯到用血清学来做的话，上面这五个我们现在急需解决的问题，都是和中和抗体有关，光测到抗体还不能证明它以后的效果，还要测中和抗体。现在要找自然宿主或者中间动物宿主，或者从反向的人畜病毒传播，从人传到动物的话，牵扯到的动物种类已经很大了，我们在澳大利亚做亨德拉病毒查自然宿主的时候，查了42个不同的野生动物。设想一下假如说血清学诊断，每一个都是要做血清学的话，这个工作量就很大了。现在血清学现在有两个很大的挑战，第一个要是中和抗体检测，第二个是不依赖于物种的血清学研究，也就是不管什么动物种，同一个血清学的方法都可以测抗体。

等一下我会介绍我们现在有一个发明，已经申请专利，有个新的血清学方法。

在讲这个方法之前，我现在重复一下多数人已经熟悉的，新冠病毒由计算机成像的图片（上图左上角），这个图大家看的很多，右边这个图大家看到的也很多，冠状病毒的名字就是这么来的，把病毒做成一个切面有点像皇冠一样的，冠的上面就是刺突蛋白。这（上图下方）就是它的基因组，在新冠病毒里面，基因组里面有一万多个氨基酸蛋白，然后病毒感染任何人或者动物的话会产生成千上万不同的抗体。在这里面真正能够起到所谓的中和抗体，具有保护作用的抗体是非常少的。我们知道它的保护抗体是S蛋白有关，上图绿的编码的是S蛋白，但是S蛋白本身也有1153个氨基酸，在这里面真正起作用的就是刚才说的，首先产生的抗体有两种，结合抗体还有中和抗体，中和抗体占的比例非常小，1%-3%。冠状病毒里的中和抗体就集中在受体结合结构域，它直接和受体结合域有关。我做新冠病毒也做了十几年，当时我一直想我们现在用的血清学的方法，我们测他的中和抗体，现在金标准是用活病毒做，就要P3实验室。工作量非常大，中和实验要3到5天，安全实验室，而且要非常有经验的科学家来操作。我在想，我们能不能改良这个方法，就在体外做，不用活病毒做，就像做酶标一样的实验。这个灵感就来自于金标准。

中和实验是这样来的，上图左上是病毒来了，病毒和受体ACE2结合，通过不同的构象变化也好内吞作用也好，最后进到细胞里面了，然后开始感染，然后致病。我们在做血清中和实验的时候，就把抗体先跟病毒孵育，然后把复合物放到细胞表面，假如用中和抗体的话，肯定可以阻断和受体的结合。中和抗体还可以阻断其他的部位，但是多数就是第一步，不让它跟受体结合。优点刚才已经说了，是金标准，没有其他方法能够跟它比，因为它是最最自然的方法，来检测中和抗体。但是有很多缺点，我刚才已经讲了。还有一点是要求非常高的P3实验室，还要求非常有经验的，一般不经常在实验室工作的人，这两个图片（上图下）给你看的话很难看出来，左边是阴性的没有中和抗体，右边是阳性有中和抗体。这本身是非常艰巨的工作。

3月10日的时候我和我的研究生一起讨论，我们是不是可以试一下模拟的抗体的测试方法。模拟的方法主要是解决这两大挑战。第一是我们要在不用活病毒测中和抗体。第二我们模拟出来的方法，应该和动物种类无关，任何动物、任何人都可以用的。

用的方法也就是应用了活病毒的做法，比如图中的病毒就是冠状病毒，冠状病毒的S蛋白，它的受体是ACE2，和ACE2结合以后就进去了（上图左边），中和抗体和S蛋白，尤其是受体结合结构域结合的话，就阻断了它的入侵，就中和了，这个是活病毒。我们通过蛋白工程把蛋白做成这个样子以后，把蛋白表达了，蓝的是S蛋白，我们只表达它的RBD很小的一部分，ACE2我们把它的跨膜部分拿掉了，就表达这部分，这是ACE2。ACE2直接包板在在ELISA板上面，为了更方便，我们把酶标，把辣根氧化酶直接它的RBD化学偶联，等RBD和ACE2一结合，放上底物，就产生蓝色反应。中和抗体跟这类完全一样，先把中和抗体和RBD的HRP蛋白（现在是没有活病毒也没有细胞，全部在酶标孔里面做）先孵育，然后再放在板上ACE2，假如是中和抗体就不能结合，不能结合的话颜色反应就没有了或者降低了。

（编辑：ASP站长网）